Лечение свиней

Из таблицы видно, что уровень накопления вируса ящура в культуре ткани с большинством сред практически мало отличался. Тем не менее из числа испытанных нами сред заслуживали внимания 4, 8 и 9-я среды. Полученные данные подтверждают практическую ценность сред-заменителей при культивировании вируса ящура по методу Френкеля.

Учитывая положительные результаты замены среды Френкеля более простыми средами при однократном культивировании вируса, выяснили возможность такой замены при серийном культивировании вируса ящура. В этих опытах были применены среды 3 и 9 (рис. 1).
Пассажи
Рис. 1. Влияние среды на размножение вируса ящура при серийном пассировании: раствор Тироде + 2% сыворотки лошади (1), раствор Тироде + 0,5% гидролизата Хоттингера (2), среда Френкеля (3).
При серийном культивировании в средах 3, 9 и Френкеля уровень размножения вируса ящура был практиче-

ски равноценным. Различия в титре вируса в некоторых опытах являются вполне допустимыми для данного метода культивирования. Титр вируса (в среднем для 11 пассажей) в среде 9 был аналогичным (10-7.1) титру вируса в среде Френкеля (10-7).

Гистоморфологические исследования эпителия языка КРС, используемого для культивирования вируса ящура в различных средах в течение 30 часов, показали различную степень переживания ткани. В средах 7, 8 и 9 ткань переживала дольше, чем в других средах, а явление пролиферации клеток герменативного слоя и подлежащей соединительной ткани было наиболее выраженным. При культивировании в солевом растворе Тироде отмечено удовлетворительное переживание ткани, хотя дегенеративные процессы выражены интенсивнее.

Влияние количества ткани в культуре на уровень размножения вируса. Вирус ящура, штамм Ф, выращивали в течение 30 часов параллельно в культурах, содержащих 2,5; 5; 10 и 20% эпителиальной ткани языка КРС в среде Френкеля. Остальные условия культивирования были одинаковыми. Эффективность культур с различным содержанием ткани проверяли в трех-ше-сти опытах. Уровень накопления вируса определяли титрованием на белых мышах (рис. 2).

Результаты титрования показали что накопление вируса в культуре, содержащей 10 и 20% ткани, было одинаковым. Уменьшение количества ткани в культуре сопровождалось заметным снижением титра вируса.

Размножение вируса в переживающей культуре различных тканей крупного рогатого скота и свиньи. Пригодность различных тканей для размножения вируса ящура была определена в опытах однократного и серийного культивирования. Для заражения культур использовали штаммы Ф и С. Культивирование вируса ящура в различных тканях проводили, как правило, параллельно при одинаковых условиях в течение 30—40 час.

При культивировании различных тканей, получаемых преимущественно от одного животного, применяли среду Френкеля в отношении с тканью 10:1. Оба штамма вируса размножались в большинстве использованных тканей; при этом оказалось, что штамм С размножался с более низким титром, чем штамм Ф во всех культурах переживающих тканей.

Наиболее высокий титр вируса получен в культуре эпителия языка КРС (штамм С — 10-т, штамм Ф — 10-7,7) и свиньи (штамма С — 10-4.3, штамм Ф — 10-6,3). По уровню размножения вируса культуры кожи свиньи, эмбриона свиньи и кишечника занимали среднее положение (штамм Ф до 10-5 DL50/мл и штамм С до 10-3.5 DL50/мл).

По мере пассирования в культурах всех исследованных тканей, кроме эпителия языка, наблюдали снижение титра вируса и полное прекращение его размножения через два-три пассажа.

Обнаружив низкий уровень размножения вируса в большинстве исследованных тканей при однократном культивировании и убедившись в невозможности серийного размножения р. них вируса ящура, мы применили метод перемежающихся пассажей для адаптации штамма Ф в культуре ткани эмбриона свиньи и кожи взрослой свиньи. Указанные ткани были выбраны на основе практической доступности. Перемежающиеся пассажи проводили в культуре переживающей ткани эпителия языка КРС.

Ткань 1,5—2,5-месячного эмбриона свиньи измельчали в мясорубке. Остальные условия культивирования были теми же, что и при однократном выращивании (рис. 3).

Вирус ящура, проведенный дважды через культуру ткани эпителия языка КРС после третьего последовательного пассажа в ткани эмбриона свиньи, при-
Культура ткани эмбриона свиньи     кожи свиньи
Рис. 3. Адаптация вируса ящура к культуре ткани эмбриона и кожи свиньи с применением перемежающихся пассажей в культуре ткани эпителия языка КРС. Обозначения: Д — культура ткани эпителия языка КРС; О — культура ткани эмбриона или кожи свиньи; @ — вирус в культуре ткани не обнаружен; цифрами указан титр вируса    Lg DL50/мл).
обрел способность размножаться в ней при непрерывном культивировании.

Для успешной адаптации вируса ящура к непрерывному культивированию в ткани кожи свиньи требовался всего один переменный пассаж в культуре ткани эпителия языка КРС.

Титр вируса после адаптации в культуре ткани эмбриона свиньи был в пределах 10~4—10-7; в культуре ткани кожи свиньи—10-3'25—10-5.

При гистоморфологическом исследовании культур различных переживающих тканей КРС и свиньи было установлено, что заражение вирусом ящура (штамм Ф) увеличивает количество пораженных клеток и значительно сокращает период переживания ткани (в 3— 4 раза).

Сравнительное изучение цитопатоген-ного действия двух штаммов вируса ящура в культуре различных тканей показало, что при заражении штаммом Ф разрушение клеток было более интенсивным, чем при заражении штаммом С.

Обсуждение

Результаты исследования подтвердили предыдущие наблюдения о возможности замены среды Френкеля более простыми и экономически доступными питательными средами. Для успешного размножения вируса ящура в культуре переживающей ткани эпителия языка КРС достаточно использовать среду относительно невысокой питательной ценности.

Культивирование вируса в ткани эпителия языка, суспендированной в солевом растворе Тироде, имеющем в качестве источника энергетического мате-

риала 0,1% глюкозы, обеспечивало получение вируса с относительно высоким титром.

Эти результаты подтверждают мнение о том, что размножение вируса ящура, имеющего сравнительно короткий цикл репродукции, обеспечивается в культуре переживающей ткани эпителия языка КРС в основном за счет использования энергетических и питательных веществ самой ткани.

Культуры, содержащие 10 и 20% эпителиальной ткани языка КРС, оказались наиболее пригодными для размножения вируса ящура. Культура, приготовленная с 2,5% ткани, имела более низкий титр вируса.

Непропорциональная зависимость между количеством ткани (2,5—20%) и титром вируса, по-видимому, свидетельствует о наличии оптимального соотношения в системе ткань — среда, а не обусловлена только изменениями количества клеток, репродуцирующих вирус.

Если иммуногенность вакцины из культурального вируса главным образом связана с тканевым антигеном, то целесообразно готовить культуры с 20% ткани. Такое видоизменение в приготовлении культуры позволит увеличить производительность культуральных сосудов при одновременной экономии дорогостоящей питательной среды.

Резкое снижение титра вируса ящура при культивировании его в различных тканях КРС и свиньи по сравнению с уровнем размножения вируса в эпителиальной ткани языка КРС и свиньи свидетельствует о выраженном тропизме вируса лишь к некоторым тканям. Известно, что, кроме эпителия языка, к вирусу ящура чувствительна ткань слизистой оболочки носовой полости КРС.

Прекращение размножения вируса ящура при серийном пассировании в культурах различных тканей подтверждает это положение. Применением перемежающихся пассажей удается преодолеть узкий тканевый тропизм вируса.

Лучшее размножение штамма Ф по сравнению со штаммом С в культурах всех использованных тканей, по-видимому, объясняется различиями в протеиновой оболочке вирусных частиц указанных штаммов, которая определяет специфичность взаимодействия в системе вирус — клетка.

Пассирование вируса ящура в течение 14 пассажей в культуре ткани эмбриона свиньи, измельченного механизированным способом, указывает на возможность применения этого способа для приготовления культуры. Эти наблюдения согласуются с результатами, полученными нами при культивировании вируса в ткани селезенки свиньи.

Выводы

1.    При культивировании вируса ящура в переживающей ткани эпителия языка крупного рогатого скота (КРС) установлена возможность замены среды Френкеля более простыми по изготовлению и экономичными питательными средами.

Лучшие результаты были получены при использовании следующих трех сред: раствор Тироде + 2% сыворотки КРС + 0,2% глюкозы + 100 мг/л аргинина; раствор Тироде + 2% сыворотки КРС; раствор Тироде+ 0,5% гидролизата Хоттингера.

2.    Вирус ящура, выращенный в культуре переживающей ткани эпителия языка КРС, содержащей 10 и 20% ткани, имел одинаковую активность. Уменьшение содержания ткани при культивировании вируса до 2,5% сопровождалось заметным снижением титра.

3.    Изучение пригодности различных тканей КРС и свиньи для культивирования вируса ящура показало, что в культуре эпителия языка КРС и свиньи вирус размножался с наиболее высоким^ титром. Способность к размножению-у штамма С была менее выражена, чем у штамма Ф в культурах различных тканей.

4.    По мере пассирования вируса в культурах исследованных тканей (кроме эпителия языка) наблюдали снижение титра и полное прекращение размножения вируса через два-четыре пассажа: применение одного-двух перемежающихся пассажей в культуре эпителия языка КРС позволило адаптировать вирус ящура к культуре ткани эмбриона свиньи и кожи взрослой свиньи.

5.    В опытах культивирования вируса ящура в ткани эмбриона свиньи показана возможность применения механизированного способа измельчения ткани, который может иметь большое значение при изготовлении массовых культур тканей и вируса.